日记名称:兽医科学与研究
文章类型:研究
收到的日期:2019年2月08
接受日期:2019年2月13日
发布日期:2019年2月15日
引文:Youssef FM,Soliman Aa,Ibrahim Ga,Saleh Ha(2019)肉鸡鸡肉脑土感染的高级细菌学研究,具有一些临床病理学改变。乙醛SCI RECH VOL:1,ISSU:1(01-10)。
版权:©2019 Youssef FM。这是一篇开放获取的文章,在知识共享署名许可协议的条款下发布,该协议允许在任何媒体上无限制地使用、发布和复制,前提是注明原作者和来源。
摘要
金黄色葡萄球菌负责肉鸡和层的大黄迹和脓肠梗关节炎。目前的工作旨在探讨和评估肉鸡雏鸡血管疾病的最常见的细菌原因及其血液学,生化和免疫效应。对于细菌检查,从患病的小鸡收集一百二十只脚拭子,并研究了细菌原因。此外,从同一情况中收集血液样品进行血液学,生物化学和免疫学分析。在本研究中,S.UUREUS在45.8%的患有肉鸡中分离出来。它以纯形式分离(18.18%);或以其他物种的混合形式:例如:大肠杆菌(58.18%),Proteus mirabilis(14.67%)和假单胞菌铜绿假单胞菌(9.1%)。用PCR分别以70%和80%的PCR检测S.UUREUS分离物的COA和SPAGEN的分子表征。Levofloxacin是孤立物种的最高敏感的抗生素药物,然后是庆大霉素,环丙沙星和阿莫西林抗生素。然而,大多数回收的分离物表现出中度至高抗性对三甲基硅,氧化酶,enerofloxacin,四环素和红霉素的高抗性。 For hematological parameters, a significant decrease in RBCs count, Hb concentration and PCV in the diseased broiler chicks indicated anemia. In addition, leucocytosis, lymphocytosis and monocytes is in naturally infected groups were recorded. Also, a significant increase in AST, ALT, uric acid, creatinine, gamma, alpha globulin, IL-6 and TNF-α levels were recorded in naturally infected chicks. Total protein and albumin levels were significantly decreased. The levofloxacine treated groups revealed significant increase in RBCs, Hb, and PCV as well as decreased number of total leukocytic count, lymphocyte and monocyte as compared with infected groups. Levofloxacine also improved the level of liver function, kidney function, IL-6 and TNF. It could be concluded that, levofloxacin represents a promising candidate to treat bacterial infections. Staphylococcal infections are higher in broilers than other organisms. Therefore, the epidemiological importance and good hyagenic measures should be taken in this field to minimize the transmissible diseases of poultry to humans.
关键词
金黄色葡萄球菌,分离,PCR, Spa基因,凝固酶,左氧氟沙星,血液学,AST,抗氧化剂,IL6, TNF。
摘要
金黄色葡萄球菌负责肉鸡和层的大黄迹和脓肠梗关节炎。目前的工作旨在探讨和评估肉鸡雏鸡血管疾病的最常见的细菌原因及其血液学,生化和免疫效应。对于细菌检查,从患病的小鸡收集一百二十只脚拭子,并研究了细菌原因。此外,从同一情况中收集血液样品进行血液学,生物化学和免疫学分析。在本研究中,S.UUREUS在45.8%的患有肉鸡中分离出来。它以纯形式分离(18.18%);或以其他物种的混合形式:例如:大肠杆菌(58.18%),Proteus mirabilis(14.67%)和假单胞菌铜绿假单胞菌(9.1%)。用PCR分别以70%和80%的PCR检测S.UUREUS分离物的COA和SPAGEN的分子表征。Levofloxacin是孤立物种的最高敏感的抗生素药物,然后是庆大霉素,环丙沙星和阿莫西林抗生素。然而,大多数回收的分离物表现出中度至高抗性对三甲基硅,氧化酶,enerofloxacin,四环素和红霉素的高抗性。 For hematological parameters, a significant decrease in RBCs count, Hb concentration and PCV in the diseased broiler chicks indicated anemia. In addition, leucocytosis, lymphocytosis and monocytes is in naturally infected groups were recorded. Also, a significant increase in AST, ALT, uric acid, creatinine, gamma, alpha globulin, IL-6 and TNF-α levels were recorded in naturally infected chicks. Total protein and albumin levels were significantly decreased. The levofloxacine treated groups revealed significant increase in RBCs, Hb, and PCV as well as decreased number of total leukocytic count, lymphocyte and monocyte as compared with infected groups. Levofloxacine also improved the level of liver function, kidney function, IL-6 and TNF. It could be concluded that, levofloxacin represents a promising candidate to treat bacterial infections. Staphylococcal infections are higher in broilers than other organisms. Therefore, the epidemiological importance and good hyagenic measures should be taken in this field to minimize the transmissible diseases of poultry to humans.
关键词
金黄色葡萄球菌,分离,PCR, Spa基因,凝固酶,左氧氟沙星,血液学,AST,抗氧化剂,IL6, TNF。
介绍
BumbleFoot是一项广泛的术语,包括禽脚的任何炎症或退行性条件。它通常发生在年龄(14-70天),但大多数情况发生在35天大约35天[1]。它可以从一个非常温和的发红或肿胀到慢性,深层坐着的脓肿和骨骼变化[2]。
金黄色葡萄球菌感染是商品肉鸡和蛋鸡常见的重要家禽疾病之一。造成死亡率(0-15%),降低禽类生产性能。金黄色葡萄球菌是鸡皮肤和上呼吸道的正常寄生菌。在家禽中,它与关节炎、骨髓炎、滑膜炎、蜂窝组织炎、皮炎、心内膜炎、败血症、伤口感染、眼炎和[4]脐炎有关。
这种疾病最常由S. aureus [5]引起的,有时涉及大肠杆菌[6],这在肉鸡中是兽医的重要性。在这种鸟类中,最常见的感染形式涉及腱鞘炎(肌腱鞘的炎症)和搅拌接头的关节炎[7]。大多数细菌病原体可以在家禽物种的呼吸系统发病率中发挥作用[8]。由于在管理案件中的高度死亡率[9],呼吸道感染对家禽的制造具有显着性,这导致了大经济损失[10]。
血液学改变记录了细菌感染的严重程度,受感染禽类红细胞计数、Hb浓度和PCV的显著下降表明小细胞低色[11]贫血。生化分析显示AST、ALT升高,蛋白变化显著。同时,观察到低白蛋白血症以及血清尿酸和肌酐[11]的升高。
Levofloxacin是氟喹诺酮组的成员,其已广泛用于治疗细菌感染。它以其宽的抗微生物活性而闻名于克革兰阴性(包括假单胞菌种类)和一些革兰氏阳性生物(包括金黄色葡萄球菌)。除了对支原体和衣原体物种的良好活性之外,它还针对链球菌和肠球菌种类的肺炎金黄色葡萄球菌和肠球菌物种的活性增强了[12]。其药代动力学研究解释了其巨大的组织渗透,大量的分布和动物体内的半衰期。Takizawa等人。(1999)[13]证明左氧氟沙星药物在各种动物感染中非常有用,包括泌尿,呼吸道,软组织,骨骼和关节。在鸟类和层中报道了左氧氟沙星药代动力学研究[14]。在肉鸡鸟类中左氧氟沙星(10mg / kg)的口服给药是安全的,因为观察到血液学或生物化学值的非显着变化[14和15]。因此,本研究的目的是探讨肉鸡农场对肉鸡农场的细菌原因,其分子检测一些基因以及伴有这种疾病的血液学,生化和免疫变化。
材料和方法
历史和临床检查:试验选用在埃及伊斯梅利亚省和扎加齐格省肉鸡养殖场饲养的20 ~ 35日龄肉鸡120只。他们都表现出了关节炎、腿部疾病或Bumblefoot病的临床症状,大约有80个病例伴有呼吸系统症状。
采样
从(脓或感染病变)的细菌拭子,显示出关节炎或大枪或腿部情感的迹象,肺癌和肝脏器官(来自患有呼吸迹象的人)的患病病例被收集用于细菌检查。此外,从肉鸡雏鸡(每种20个)收集血液样本(抗凝血血液和血清)用于血液学,生化和免疫研究。此外,在治疗5天后,收集来自治疗的肉鸡雏鸡的另外20个血液样品。
细菌检查
细菌微生物的分离和鉴定:将所有样品拭子和器官样品培养到营养肉汤中,在37℃下在37℃下培养在24小时内,然后在血液和麦克基琼脂平板上铺张,并在37℃下重新孵育24小时。孵育后,挑选菌落并亚培养直至获得纯生长。甘露醇盐琼脂培养基用于具有条纹方法的S.UUREUS的特异性分离,然后孵育。在37℃的绵羊血液琼脂介质板上检查了S.UUREUS和E.COLI分离物的溶血素活性[16]。此外,eM(eosin甲基蓝色)和假单胞菌F琼脂培养基用于物种特异性检测大肠杆菌和假单胞菌种类。基于它们的形态,文化特征和克染色来确定分离的生物的纯度。根据[17],还完成了分离的细菌种类的生化鉴定。
分离物的血清学鉴定大肠杆菌:E.COLI分离物被生物化学鉴定,然后根据[18],通过使用多价体细胞抗血清进行血清学鉴定,用于施加滑动凝集试验。这项工作是在动物健康研究所(AHRI)的血清学单位进行。
刚果红结合测定[19]:大肠杆菌阳性样品在刚果红琼脂板上划线,以确定大肠杆菌分离株的致病性。每株分离物在无菌分离板上划线,37℃保存24小时。培养24小时后,室温保存48小时。致病大肠杆菌由刚果红阳性菌株产生砖红色菌落进行鉴定。非致病性菌株在室温下48h后呈无色。
孤立的细菌的抗生素敏感性测试:对九种常用抗菌剂的板(1μg),阿莫西林+克拉维酸(10μg),庆大霉素(120μg),环丙沙星(120μg),环丙氟苯胺肽(120μg)。(5μg),红霉素(15μg),四环素(10μg),富含氧氟沙星(5μg),三甲基丙嘧啶(30μg)和牛奶蛋白(1μg),标准Kirby-Bauer盘扩散方法[20]。结果是根据临床和实验室标准研究所推荐的抗微生物易感测试的标准进行解释[21]。将鉴定为将三种或更多种抗生素分离抗生素的易感性被归类为多药耐药性(MDR)菌株。
金黄色葡萄球菌Coa和Spa基因的分子检测
DNA提取:it was done for ten selected S.aureus isolates using the QIAamp DNA Mini kit (Qiagen, Germany, GmbH) were performed at RLQP (Reference Laboratory for Veterinary Quality Control on Poultry Production) with some manufacturer’s modifications for screening for Coa, and Spa genes of S.aureus isolates. Briefly, 200μlofthe sample suspension was incubated with 10μl of proteinase K and 200 μl of lysis buffer at 56 °C for 10 min. After incubation, 200μl of 100% ethanol was added to the lysate. The sample was then washed and centrifuged following the manufacturer’s recommendations. Nucleic acid was eluted with 100 μl of elution buffer provided in the kit. The Oligonucleotide Primers used were supplied from Metabion (Germany) were listed in (Table 1 and 2). For PCR amplification, the primers were utilized in a 25μlreaction containing 12.5μl of Emerald Amp Max PCR Master Mix (Takara, Japan),1μl of each primer of 20 pmol concentrations, 4.5μl of water, and 6μl of DNA template. The reaction was performed in an applied biosystem 2720 thermal cycler.
分析PCR产品:使用5V / cm的梯度在室温下在1x TBE缓冲液中通过电泳,通过电泳分离PCR的产品。对于凝胶分析,在每个凝胶槽中装载了20μl的单三一单PCR产物。使用凝胶试验100 BP DNA梯子(Qiagen,德国,GmbH)和基因尺100bp梯子(Fermentas,Sigma)来确定片段尺寸。通过凝胶文件系统(Alpha Inno Tech,Biometra)拍摄凝胶,通过计算机软件分析数据。(表1和2)
Hematologicalstudies:根据[22]测定总红细胞计数,血红蛋白浓度,包装细胞体积,总白细胞计数和差动白细胞计数。
血清生物化学分析:为血清生物化学测定收集的血清。根据[23]肌酸酐[24],尿酸[25],总血清蛋白[26],白蛋白[27]和球蛋白,根据[23],氨基二酮转移酶(AST)和丙氨酸氨基转移酶(ALT)的水平[28] [28]。通过使用从(Spectrum,Cairo,Egypt)购买的商业套件,通过使用半自动分光光度计(Erba-Chem7,德国)分光光度测定这些参数。
免疫学研究
- 蛋白电泳采用sd聚丙烯酰胺凝胶电泳,根据生物化学系动物卫生研究所[29]标准进行。
- Interle介素-6的测定:收集的血清显示出100%与ELISA试剂盒的交叉反应性,血清IL-6检测的极限为31.2pg / ml。根据制造商的议定书进行ELISA测定。
- 肿瘤坏死因子的测定:试验依据[30]绘制。
现场处理:当然感染的雏鸡接受了对农场的治疗,如下:将左氧氟沙星(10mg / kg B.W)[31]加入饮用水中。Levofloxacin was purchased from Sanofi Aventis company, and prepared as the following: Grinding of tablets (500 mg) with 10 ml distilled water then drinking to chicks according to dose (levofloxacin 10 mg/kg b.w) as concentrate 0.2 ml per os/ chick/once daily) for four successive days. Birds were kept under observation after the end of treatment.
统计分析:采用MiniTab17©软件,考虑P < 0.05,采用单因素方差分析(ANOVA)方法对所得数据进行统计分析。采用Fisher多量程检验比较[32]均值。
结果
在这项研究中,观察到的患病肉鸡雏鸡的临床症状是:肿胀的脚垫图1:(1),脚坏皮炎(2),肿胀和炎症的Hock接头(3),无法稳定(4)。验尸检查表明,120例中的45例显示肝脏具有透明的隐性炎,肺和心包炎的拥塞(5和6)。
图1:(1),脚坏皮炎(2),肿胀和炎症的毛孔接头(3),无法支架(4)。验尸检查表明,120例中的45例显示肝脏具有透明的隐性炎,肺和心包炎的拥塞(5和6)。
从患有脑病血管病变的肉鸡的120swabs样品的细菌学调查显示,金黄色葡萄球菌是该研究中遇到的最常见的细菌分离物。本研究中的金黄色葡萄球菌的总体百分比为45.8%(55/120)。金黄色葡萄球菌以纯粹的形式分离为18.18%(10/55)的肺部病变患病病例。此外,它以混合形式与来自脑部患病病例的其他细菌物种分离,也来自其他病例的肺和肝脏器官,呼吸系统标志:32/120与大肠杆菌混合(26.67%);将8个分离物与蛋白质物种(6.67%)和5个分离物混合,如表3所示,用假单胞菌铜绿假单胞菌(4.17%)。
得到的E.Coliisolates的血清型显示出十个分离物是o78.,五个o55.,六个o158.,五个o86A,o四个1和o的两个11.如表(4)所示。用刚果红色测试,o的血清型78.阿,55.和o.1是积极的,而其他人没有给予反应。刚果红阳性结果由橙色或亮红色菌落的发育表示,而白色颜色表示为阴性结果。(表4)。
回收分离株的抗生素敏感性测试结果。金黄色葡萄球菌,E.coli,P. Mirabilisand P. Aruginosain本研究开发了最高敏感性术抗左氧氟沙星。庆大霉素,环丙唑辛,阿莫西林,三甲基丙嘧啶,氧化嘧啶,Enerofcin,表现出从中中间体以抗性的不同程度显示表5。
S.S.Smuces分离物的CoA和Spa基因的分子表征显示,经过常规PCR反应的70%和80%的活菌分离含量为阳性并分别在特定扩增子尺寸:570bp和226bp处发出透明条带。在图2和3中显示。
图2:琼脂糖凝胶电泳显示金黄色葡萄球菌Coa基因产物570bp片段经特异性引物扩增阳性。L: 100-1500bp DNA ladder;Pos:金黄色葡萄球菌阳性对照;lanes1-10:金黄色葡萄球菌1、2、3、5、6、9、10 +ve结果;4、7、8号车道,结果是;否定:消极的控制。
图3:显示琼脂糖凝胶电泳,显示出用特异性引物进行S.aureus的Spa基因的产物226bp片段的阳性扩增。Lane L:DNA分子大小标记(100-600bp),泳道1-10:1,3,5,6,7,8,9&10 + ve结果的s.aureus;泳道2和4 -VE结果;车道(POS):阳性控制和车道(NEG):负控制。
在表6中报道了本研究中天然感染的肉鸡雏鸡的血液学发现。血液学参数显示出在患病鸟类中的RBCS计数,HB浓度和PCV的显着降低,表明贫血与对照组相比。此外,与对照组相比,患病基团中总白细胞计数,淋巴细胞和单核细胞的总体细胞计数,淋巴细胞和单核细胞显着增加。在左氧氟沙星治疗组中,与患病组相比,患有RBC,Hb浓度和PCV水平的显着增加,它们与显着健康组密切相关。
表6在农场中显然健康自然感染和治疗的肉鸡雏鸡中的血液学参数。n = 20。此外,在表7中揭示了在天然感染和治疗的肉鸡雏鸡中一些生化和免疫参数的结果。(AST&Alt),尿酸,肌酐,α和γ球蛋白的升高显着增加。与对照组相比,记录了低温血症,低恶蛋白血症和患病总球蛋白的显着增加。与患病组相比,左氧氟沙星治疗组揭示了总蛋白,白蛋白,γ和α球蛋白的水平的改善。在本研究中,与经过处理的鸟类相比,在患病鸟类中观察到IL-6和TNF-α血清的显着增加。左氧氟沙星治疗组揭示了IL-6和TNF-α血清水平的改善。
表7:在农场显然健康的天然感染和治疗的肉鸡雏鸡中的一些生化和免疫参数。n = 20。
讨论
跛行或腿部无力是描述由细菌或病毒等多种原因引起的症状性词汇。这对肉鸡生产性能有不利影响,并可能增加肉鸡的发病率和死亡率。脓性关节炎、细菌性软骨坏死合并骨髓炎被认为是商品肉仔鸡跛足的最常见原因。
在本研究中,观察到的患病鸟类的临床症状肿胀的蜂窝接头,龙骨骨,无法忍受,脚坏皮炎,不愿意移动,逐渐消退,终于死亡。[34,35]记录了相同的迹象。后期检测天然感染的鸡显示出填充有炎症渗出物的关节肿胀,霍克,窒息的关节炎以及内脏的拥堵。这些结果同意揭示了霍克,窒息,焦点关节和椎骨骨膜炎的关节炎。Youssef和Dalia,(2012)[35]报道了对天然感染的鸡的后期检查显示肿胀和坏死的梳子,坏死和肝脏,脾脏,肾脏和肺部充血。其他鸟类受到肿胀的关节,充满炎症渗出物。
葡萄球菌是皮肤和粘膜的正常居民和家禽孵化,饲养或加工的环境中的常见生物。大多数葡萄球菌物种被认为是正常的植物群,但是当发生宿主的自然防御机制崩溃时,致病感染将引起肉鸡农场的体重增加,鸡蛋生产和经济损失的率降低[35]。
根据大枪或关节炎肉鸡的细菌调查结果和或呼吸患病病例,金黄色葡萄球菌是最近在纯或混合形式的120例病例中遇到的最常见的细菌分离物(45.8%)。通过[36,37]逐渐达到类似的结果,该结果检测到由S.UUREUS引起的化粪池关节炎的患病率为50.98%,从不同的肉鸡养鸡场收集的时间关节炎症状。同时,S.金黄色葡萄球菌的较高患病率比Hock接头的血吸比高达81%。此外,(Feizi等,2012)[38]表示,由于伊朗肉鸡的金黄色葡萄球菌导致的患病性关节炎的高普发率(85.71%)。不同,Sharkia Goversorate中的Arthritic Broiller关节的S. aureus(36.6%)的低分离率[39]。
金黄色葡萄球菌在家禽中最常见的感染部位是骨骼、肌腱、鞘和关节,特别是胫跗骨和膝关节[36]。关节炎被认为是由于管理不善、饮食和围栏内的创伤因素造成的,包括栖息不当、卫生条件差、脚底穿洞和腿部骨折。此外,金黄色葡萄球菌引起的肺炎是囊性纤维化患者和受免疫抑制疗法[41]影响的患者的严重并发症。
此外,还分离出与其他细菌种类的S.UUREUS的混合培养物。结果表明将32个分离物与大肠杆菌混合,将8个分离物与Pr混合。Mirabilis和Pssudomonas的型如表3所示。以相同的方式[42]回收了纯培养物中的十六个分离物中的四个阳性S. aureus分离物,将10个分离物与大肠杆菌混合,并将2分离物与Proteus mirabilis混合。类似于大肠杆菌(28.6%),或沙门氏菌(1.3%),或假单胞菌(1.95%)和Pasteurella multocad(1.95%)的类似结果,从关节炎肉体病例中分离[43]。此外,(Pleydell等,2007年和Lutfulkabir,2010)[44,45]表示,从受感染的肉鸡的骨骼中回收的葡萄球菌的分离物;与其他细菌一起混合,如大肠杆菌,分枝杆菌,沙门氏菌SPP。和肠球菌。
检查的E.COLI分离物的血清型阐明了大肠杆菌分离株的最普遍的血清组是由O的O7855.阿,158.然后是O.86A阿,1和o.11.如表3所示。[46]报道血清型O检测到几乎类似的结果78.是来自患病肉鸡最常见的(28.2%)。此外,[43] Labdah等人,(2015)分类为6种不同的血清型:o78.(30),o125.(14),o55.(16), O166.(6)和O146.(4)。
关于刚果红结合活性作为大肠杆菌的病例因子,19/32(59.4%)分离物得到阳性结果,而其他血清型没有将刚果红染料结合到接种后48小时。这些结果与[47]类似,谁观察到20个分离株56(35.7%)是刚果红阳性的,36个分离物(64.3%)是埃及肉鸡鸡的阴性。此外,[48]显示53大肠杆菌分离株(60.4%)的32个刚果红色阳性。
在本研究中,如表3所示,PR的低分离速率(6.67%)。记录了与金黄色葡萄球菌混合培养的Mirabilis。以同样的方式,[49,43] Hassan等人。,2012年提到了PR。Mirabilis被孤立于18个月大的母鸡,毛皮血管,当接种到鸡的脚板时,它能够通过实验再诱导疾病。在同一表中,在所有检查样品的4.17%(5/120)中分离出P.铜绿假单胞菌的混合感染。这结果几乎类似于(Hebat-Allah,2004)录制的PS。Aeruginosa从3.3%的检查肉鸡。它是产生各种毒素和可能有助于致病性的毒素的禽病原体[50,51]。John Barnes(1997)[52]表示,由于皮肤伤口或卫生不足(污染疫苗,鸡蛋浸泡或鸡蛋接种期间,污染的植物在感染的羊群中使用污染的房屋的卫生术,可能会发生假单胞菌感染。
随着时间的推移,由于在家禽饲养中频繁使用抗菌药物,家禽来源葡萄球菌中抗菌药物耐药性的发生在家禽养殖场中有所增加。事实上,多年来一直在使用抗菌剂,不仅是为了控制和预防疾病,而且也是为了促进生长和提高饲料转化效率。结果表明,大多数抗生素(甲氧苄氨嘧啶、恶沙林、ener氧氟沙星、四环素和红霉素)对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、大肠杆菌和红霉素均有中至高耐药性。记录了Mirabilis和Ps.aeruginosa分离株。但左氧氟沙星对所有分离细菌的敏感性最高,其次是庆大霉素、环丙沙星和阿莫西林,其不同程度的敏感性见表5。左氧氟沙星是一种氟喹诺酮类药物,体外抗革兰氏阳性细菌(包括金黄色葡萄球菌[53])活性提高。此外,(Rohner et al., 1992)[54]显示,在一些实验研究中,该组与标准抗葡萄球菌治疗在严重的金黄色葡萄球菌感染中表现出加性效果。左氧氟沙星是氧氟沙星的异构体,对金黄色葡萄球菌[55]具有较高的体外活性,在异物实验模型[56]中表现出良好的活性。根据药代动力学参数,左氧氟沙星剂量为(10 mg/kg b.w);每24小时肌肉/口服给鸡,保持有效的血药浓度与细菌感染[31]。
S.aureus的毒力是复杂的。这取决于一系列毒力基因,其聚集成2类:细胞表面相关(粘附)和分泌(外毒素)基因[57]。CoA基因(或凝壳酶)是鉴定金黄色葡萄球菌菌株的主要决定因素。它是一种传统上的细胞外蛋白,其用于区分从较低的毒性凝固酶阴性葡萄球菌的凝固酶正葡萄球菌[58]。
在本研究中,所有检测的金黄色葡萄球菌菌株的凝固酶基因扩增产物在570 bp处被清除。在这项研究中,70%的被检测的分离株回收率很高。此外,编码蛋白A的Spa基因;主要用于金黄色葡萄球菌[59]的分型。蛋白A是一种重要的外蛋白毒力因子,它能使微生物逃避宿主的免疫应答。其分子量为42KD。它以共价固定在金黄色葡萄球菌的肽聚糖上。大约90%的蛋白A存在于细胞壁中,剩下的10%游离于细菌的细胞质中。在金黄色葡萄球菌的MRSA菌株中,蛋白A不能粘附在细胞壁上,因此释放到培养基(秘书蛋白)[60]。在这项研究中,80%的检测菌株中发现了它。 Vintov et al. (2003) [61] cleared that the polymorphic coa and spa genes could be used to investigate the diversity of S. aureus.
所获得的血液学参数结果显示RBCS计数,Hb浓度和PCV中的显着降低,表明贫血与细菌生物的感染严重程度相关。这些结果符合[62,11]。此外,记录了感染和对照组之间的白细胞计数,淋巴细胞和单核细胞的总显着增加。同样,Sakiniene等人。(1999)[63]据报道,金黄色葡萄球菌感染可能导致白细胞增多率和[64] Lucke等人。(2003)记录了受感染动物的白细胞计数的显着增加。在左氧氟沙星治疗组中,与患病组相比,患有RBC,Hb浓度和PCV水平的显着增加,它们与显着健康组密切相关。我们的结果表明,与患病组相比,治疗组中白细胞的白细胞显着降低。这些结果表明左氧氟沙星对微生物的抗菌作用[12,65]。Lee等人,(2017)[66]显示5mg / kg左氧氟沙星的给药似乎有效杀死大肠杆菌。
S.金黄色葡萄球菌分泌抑制补体激活的蛋白质,含有髓中性粒细胞,中和抗微生物肽并降低中性粒细胞的有效性。它可以在吞噬蛋白酶中存活,表达多糖和蛋白质通过抗体和补体抑制opson化,并且它是对溶菌酶的细胞。此外,S.UUREUS具有几种类型的超级抗原,损坏了正常的体液免疫应答,导致免疫抑制[67]。S. aureus引起的肺炎的特征表现是强烈的宿主炎症反应,其特征在于对感染部位的嗜中性粒细胞快速和过度募集[68]。
这项工作中血清AST和ALT水平的增加可能是由于受感染的细菌产生的肝损伤。坎贝尔和科尔斯(1986)[69]提到,AST的活性增加与鸟类中的肝细胞损伤有关。此外,他们报告了在感染细菌的鸟类中的Alt升高。我们的结果达成了[70,71]谁观察到鸡肉中(AST&Alt)的显着增加,感染了大肠杆菌。本作本作中总蛋白和白蛋白的显着变化可能是由于肝脏和肾脏损伤,这可能与细菌感染有关。以前提到了类似的发现[69,71-73]。
细菌毒素增加毛细血管渗透性,允许血浆蛋白逸出到导致冻干血症的组织中[74]。α和γ球蛋白的升高通常表明免疫系统的激活,这是由于感染或炎症性疾病[75],并且可能与细菌败血症或慢性感染有关[74-76]。在具有大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的实验感染的鸡中记录了鸡中的β和γ球蛋白的增加[76]。与患病组相比,左氧氟沙星治疗组揭示了总蛋白,白蛋白,γ和α球蛋白的水平的改善。
尿酸和肌酐的增加可能是由于微生物及其毒素对肾脏的影响。我们的结果完全符合[11,71,72,77]的报告,在肾脏疾病的情况下肌酐和尿素水平最高。呼吸病禽尿酸和肌酐显著升高。这种增加可能与蛋白质分解代谢增加、发热性呼吸系统疾病、心功能受损和肾血流减少有关[78]。
白细胞介素-6是在损伤部位或感染的位点释放的最具血吸虫白细胞介素之一[79]。一些调查员报告说IL-6可以激活骨核糖体,这在关节炎过程中增加关节的损伤[80]。在几种动物模型中,在整个S. aureus关节炎过程中观察到血清IL-6水平增加。白细胞介素-6由许多不同的细胞类型产生,并作用于B淋巴细胞,T淋巴细胞,肝细胞,造血祖细胞和中枢神经系统的细胞[79]。在本研究中,与经过处理的鸟类相比,患有禽类鸟类中的IL-6和TNF-α血清的显着增加,这与(周等,2007)[79]在葡萄球菌的模型中类似于报告关节炎。然而,与左氧氟沙星治疗的S. aureusInfected鸟类在患有患者的鸟类相比,血清中的IL-6水平降低。周等人,(2007)[79]表明,与左氧氟沙星治疗的感染肉鸡血清中减少了IL-6活性和浓度(P <0.05),与仅与金黄色葡萄球菌注入的鸟类相比。
肿瘤坏死因子-α(TNF-α)是类风湿性关节中存在的主要甲基丙酮,并且均诱导基质降解蛋白酶的滑膜成纤维细胞的合成和分泌。随后发现随后发现慢性疾病中萎缩的分子的纯化和克隆,这与TNF-α相同。通常,通过细胞因子之间的相互作用,包括肿瘤坏死因子(TNF)的激活和相应的受体和神经内分泌途径(Woodcock和Morganti-Kossmann,2013)。产生了系统炎症反应主要是巨噬细胞,较小程度的淋巴细胞,单核细胞和巨噬细胞,但许多非免疫细胞类型,包括成纤维细胞,神经元,角质形成细胞和平滑肌细胞,也产生TNF。TNF-α充当局部炎症免疫反应中的关键中间体,是发起细胞因子级联的急性期蛋白质。此外,高水平的TNF导致血管渗透性增加,从而募集巨噬细胞和中性粒细胞到损伤和/或感染的部位(Esposito和Cuzzocroa,2009和Woodcock和Morganti-Kossmann,2013)。
左氧氟沙星是氟喹诺酮类药物的一种,具有良好的抗微生物活性。Hu等(2002)[65]的研究表明,左氧氟沙星对禽葡萄球菌的控制效果较好,尤其是在饮用水中使用时。血清肿瘤坏死因子-α (TNF-α)和IL-6水平与感染过程的严重程度有关。此外,IL-1β和TNF-α可诱导软骨细胞和滑膜巨噬细胞在骨局部释放大量il -6,从而在关节炎过程中增加关节损伤[79]。
结论
家禽中的葡萄球菌感染很高,特别是在大黄迹疾病或关节炎疾病中。因此,由于其流行病学重要性,必须在现场采取措施,以最大限度地减少从家禽到人类传播的人畜共患疾病。血液学,生物化学和免疫学分析(IL-6和TNF)可以反映微生物的发病机制。左氧氟沙星治疗成功治疗肉鸡农场的疾病。
没有参考