密码寄生虫是一种apicomlexan动物病原原体,主要引起脊椎动物宿主的腹泻,主要是牛和人使用CGP60基因片段观察智利两个远地生物地理区(Metropolitan和Los Rios区域)奶牛小块密码传播动态从腹泻小腿中采集72个fecal样本筛选寄生虫显微镜使用PCR直接检测SangerGP60Carvum子类型并同时选择样本NGSGP60相同基因碎片以确定同和/或别IIA15G2R1子类型存在于LosRios区域100%牛排样本中连同同一种子类型,大都区、IIAA17G2R1和IAA17G4RNGS单选GP60PCR仿真样本显示Sanger定序子类型相似,IBA17G4R使用此方法后再多频IIa子类型svum确认寄生虫多子类在受感染宿主中可能存在由C制作微信有限子类型数,即IgaA15G2RIIa子类型家庭被认为南美小牛群居中二类AA17G2R1和二类A17G4R1全C在智利小牛观察到的arvum子类型与腹泻动物隔离开来,因此,有可能将其存在与牛宿主病原作用相关联,并可能对人类产生消化疾病风险

加密子宫GP60奶牛,流行病,拉斐亚,智利

GP60: 60kDaglycotein小子单元串行式脱氧核糖核酸聚合物链响应MR:大都区LosRios区域NGS:下一代顺序MZN:修改Ziehl-NeelsenCOX1:Cycroxigenase1BLAST基本局部对齐搜索工具NCBI:国家生物技术信息中心

密码寄生虫是一种apicomlexan动物病原原体,主要引起脊椎动物宿主的腹泻,主要是牛和人使用CGP60基因片段观察智利两个远地生物地理区(Metropolitan和Los Rios区域)奶牛小块密码传播动态从腹泻小腿中采集72个fecal样本筛选寄生虫显微镜使用PCR直接检测SangerGP60Carvum子类型并同时选择样本NGSGP60相同基因碎片以确定同和/或别IIA15G2R1子类型存在于LosRios区域100%牛排样本中连同同一种子类型,大都区、IIAA17G2R1和IAA17G4RNGS单选GP60PCR仿真样本显示Sanger定序子类型相似,IBA17G4R使用此方法后再多频IIa子类型svum确认寄生虫多子类在受感染宿主中可能存在由C制作微信有限子类型数,即IgaA15G2RIIa子类型家庭被认为南美小牛群居中二类AA17G2R1和二类A17G4R1全C在智利小牛观察到的arvum子类型与腹泻动物隔离开来,因此,有可能将其存在与牛宿主病原作用相关联,并可能对人类产生消化疾病风险

加密子宫GP60奶牛,流行病,拉斐亚,智利

GP60: 60kDaglycotein小子单元串行式脱氧核糖核酸聚合物链响应MR:大都区LosRios区域NGS:下一代顺序MZN:修改Ziehl-NeelsenCOX1:Cycroxigenase1BLAST基本局部对齐搜索工具NCBI:国家生物技术信息中心

sporidium palvum(Protozoan,Apricomlica)是全世界小牛中欧卡里教单生腹泻的最重要原因之一,也是人类密码寄存[1、2]的两个主要原因之一急性腹泻小腿显示疲软、厌食症、发烧加脱水、崩溃和死亡[3]此外,奶牛群感染会减少牛奶生产量,因为营养不良吸附[4]等营养复杂问题牛排生产也会受到影响,因为预肥小牛的密码寄存导致每日平均增重下降[5]由受感染小牛排泄的密码子细胞可污染环境,通过动物之间和人类[6]的排泄方式促进疾病的传播牛实为动物圈密码子中最重要的源受污染分水岭是其他动物和人类感染的重要源头,在发展中国家尤其如此,那里的灌溉系统包括缺水防止排泄物污染的河流[8-10]分子识别GP60方法全过程arvum隔离被广泛使用研究寄生虫群结构及其小牛传播动态[11]GP60基因核化变异大于密码子组平均变异,并用异差法定义不同隔离群类(子类家庭)[12]牛群常受C感染PARVIMIIA子类型家庭子类型IgaA15G2R1被认为是高致病性并在全世界最常感染小牛,同时在欧洲、亚洲和埃及二维子类型家族大都观察到感染这些动物[1314]当前工作的主要目的是通过描述CGP60子类型,从分子角度研究智利牛密码sporidis似然染色介子乳牛群 从两个不同地理区

首都大区MR33°27S70°40#W两家奶牛园选择排积采样马里奎纳州、Rio Bueno县和Valtivia县Los Ris大区39°4850#S73°14#45#W采样直接从动物直肠上用50ml单调离心管进行(ThermoFisher公司、匹兹堡PA公司、USA),并保留70%乙醇直到处理fecal样本离心机为1500克5分钟,沉积滑槽1毫升重转至1500毫升微离心管并存储于4oC样本涂上玻璃滑动片,染上修改后Ziehl-Neelsen(mZN)并用光显微镜检查100X放大脱氧核糖核酸从cryposporidium阳性样本中提取并用商业包(ZRFECLDNCMINPrep++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++脱氧核糖核酸样本均由PCR用SSU-rDNA加密子素和COX1单素排除PCR抑制活动[1516]两次测试中的脱氧核糖核酸阳性样本提交PCR放大GP60基因,使用提取脱氧核糖核酸2.5ml和gp15-ATG素数(5'ATGATGATGETGETCTCATT3's)和gp15STOP5'TTACAGAGAGAGGGTG3's,预期产生约1,000b判定每种隔离的物种和子类型组时,使用基本局部对齐工具对齐嵌入Genbank的序列采样序列使用Sulaimanet(2005年)[17]。下一代序列分析单选脱氧核糖核酸样本过滤和质量裁剪后,FASTA格式化序列与FASTX工具集入在线数据分析平台银河系统分析,以确定使用崩溃序列选项判定TCA/TCG重复寄生虫子排版数[18]

50%样本展示显微密码子细胞学,18个MR样本和18个LRR样本sU-rDNA单片共29个分片呈阳性,只有15个分片(51.7%)为GP60正复数,其中5个来自MR,10个来自LR三Carvum子类型归IIA15G2R1、IBA17G2R1和IBA17G4R1在LRR中,二AA15G2R1子类型在牛寄生虫样本的100%中观察到(表1)。NGS单选脱氧核糖核酸样本分析显示类似为主SangerIIaA17G4R1GP60子类型,90%可读序列与其他不常用子类型并列(表2)。

SSU-rDNA密码子阳性样本中只有51.7%对GP60呈阳性gposporidium基因组有独一无二副本,而不是SSU-rDNA基因组,SSU-rDNA基因组拥有五份副本,使其在PCR解析中敏感度较低[1920]预断断食牛最易感染,特别是C相似性,但观测到C类寄生虫bovis公司ryanae和Cdersoni解释微镜形态测试中PCR增益简单数GP60安普利昆斯排序所有属于IIA子类型家族(表1)。有趣的是,LRR中二AA15G2R1子类型在100%样本中观察到C.palvum子类型IIa在南美阿根廷、哥伦比亚和巴西[22-24]等国家居多在智利,IIA15G2R1样本占86.6%,与其他国家研究数据一致风等描述IIA15G2R1子类型高可传输性为自适应特征[25]IIA17G2R1在欧洲和美国牛群中也有描述亚型IIaA17G4R1从腹泻小牛[24]中也观察到哥伦比亚样本中观察到子类型多样性,但在智利两个地理区域中占主导地位子类型为IIAA15G2R1,表示高度感染特征新生儿腹泻小牛大都可能因区域生物地理特征而感染,地表水道多[26,27]有趣的是,NGS单选脱氧核糖核酸样本分析显示类似主IAA17G4R1GP60子类型,90%的可读序列与Objective子类型显示结果时使用NGS方法确认多子类型Csvum自然出现在受感染宿主中,如[28]前报告的那样

总体结论是,在智利两个不同的生物地理区域中,新生儿小块密码寄生微量子类型主寄生虫子类型IIA15G2R1C出现levum对人的潜在感染风险,特别是乳农工和兽医,他们与受感染动物接触最多。这项研究有助于加深理解智利南美和全球密码传播动态

该议定书得到了智利圣地亚哥全国调查委生物伦理咨询委员会的批准(NO018/FONDECYT/MedicaG2G3/0499)。先前研究中从农场主处获取粪便样本时获得了口头同意

作者声明他们没有竞技兴趣

本研究使用并分析的数据集可应合理请求从相关作者处获取

未为此项研究使用机构筹资资源

SP执行脱氧核糖核酸隔离程序,执行PCR程序,生物信息分析并起草手稿PM、ER和FF帮助回收部分样本并修改手稿LSO执行PCR生物信息分析并修改手稿RM构思设计,进行显微检查,进行生物信息分析并起草手稿所有作者阅读并批准最终手稿

感谢Dr.Mario Duchens动物生产系动物科学学院智利大学智利圣地亚哥分校