描述了一种简单且选择性的UPLC方法，用于使用由80体积甲醇和20体积水的混合物组成的流动相，在C18柱上测定托吡酯色谱分离的测定，检测为276nm。在50-150μg/ ml的托特拉酸盐（R2 = 0.998）范围内观察到线性，因为所提出的方法估计的药物与标签索赔良好。GydF4y2Ba

描述了一种简单且选择性的UPLC方法，用于使用由80体积甲醇和20体积水的混合物组成的流动相，在C18柱上测定托吡酯色谱分离的测定，检测为276nm。在50-150μg/ ml的托特拉酸盐（R2 = 0.998）范围内观察到线性，因为所提出的方法估计的药物与标签索赔良好。GydF4y2Ba

UPLC是指超高效液相色谱。它具有在高压下操作的设备，而不是HPLC和在该系统中使用的设备，使用细颗粒（小于2.5μm）和移动相，在高线性速度下降低柱的长度，减少溶剂消耗并节省时间。GydF4y2Ba

根据VAREEMET方程，随着粒度降低至小于2.5μm，效率显着增益，而通过使用较小的颗粒，速度和峰值容量，效率不会降低效率或线性速度。因此（梯度分离中的每单位时间分辨的峰值数）可以扩展到新的限制，称为超级性能液相色谱或UPLC，该技术充分利用色谱原理来使用填充较小颗粒的柱进行分离（小于2.5μm）和/或更高的流速增加速度，这赋予了卓越的分辨率和灵敏度。GydF4y2Ba

UPLC基于使用小于2.5μm的颗粒的固定相的原理（而HPLC柱通常填充3至5μm的颗粒）。GydF4y2Ba

H = A + B / V + CVGydF4y2Ba

在哪里;GydF4y2Ba

A，B和C是常数GydF4y2Ba

v是线性速度，载气流量。GydF4y2Ba

*术语与速度无关，并且代表“涡流”混合。当包装的柱粒子很小且均匀时，它最小。GydF4y2Ba

B术语表示分子的轴向扩散或自然扩散趋势。这种效果在高流速下减少，因此该术语由V除以v。GydF4y2Ba

* C项是由于分离过程中的动力学抗性。因此，术语与v成比例。GydF4y2Ba

超级性能液相色谱法具有更高的速度，灵敏度和分辨率在更宽的线性速度，流速和背压范围内更有效地工作，以获得优异的结果图1。GydF4y2Ba

Acquity UplC系统包括GydF4y2Ba

分析方法开发指南图2。GydF4y2Ba

通过色谱条件的变化影响的参数是：GydF4y2Ba

分析中定量方法验证期间要考虑的性能特征。GydF4y2Ba

药物名称：Topiramate图3。GydF4y2Ba

[（1R，2S，6S，9R）-4,4,11,11-四甲基-3,5,7,10,12-五氧催碱[7.3.0.0,12-戊酮，十二烷-6-基]甲基磺酸盐GydF4y2Ba

CGydF4y2Ba_12.GydF4y2BaHGydF4y2Ba_21.GydF4y2Ba不GydF4y2Ba_8.GydF4y2BaS.GydF4y2Ba

339.362GydF4y2Ba

托吡酯的精确作用机制尚不清楚。然而，研究表明，托吡酯通过以时间依赖性方式通过持续的神经元持续去极化而重复地引起的动作电位，这表明了一种状态依赖性钠通道阻断作用。Topiramate还增加了神经递质γ-氨基丁酸酯（GABA）在GABAA受体的某些亚型（对照组成氯化物通道）的亚型的活性，这表明通过增强GABA活性的可能机制。GydF4y2Ba

流动阶段：GydF4y2Ba80体积甲醇和20体积水的混合物。流动相超声处理10分钟以除去气体表1-3。GydF4y2Ba

托吡酯标准股票溶液的制备：GydF4y2Ba称量10mg托吡酯并转移到100mL容量瓶中并溶解在甲醇中，然后用甲醇弥补10μg/ ml溶液，用甲醇稀释1ml至10ml制备10μg/ ml溶液。GydF4y2Ba

最大吸收的波长（λGydF4y2Ba_{最大限度GydF4y2Ba}）使用200-400nm波长区域的UV可见分光光度计扫描甲醇的甲醇中的10μg/ ml药物的10μg/ ml溶液。所得光谱显示在8.3中，吸收曲线显示276nm的特征吸收最大可用于托吡酯，选择为UPLC色谱法的检测器波长。GydF4y2Ba

通过使用不同的化学品和试剂，不同pH范围的有机溶剂和不同的缓冲液和有机溶剂的强度进行了各种分析显性跟踪，以分离峰形。基于从在UPLC上进行的色谱迹数获得的观察结果和结论，优化了一种特定的色谱条件，以适合于估计片剂中的托吡酯。下面给出了发现适合估计托吡酯的优化色谱条件。GydF4y2Ba

根据试验方法制备标准溶液并注射到色谱系统中。评估系统适用性参数，如保留时间，理论板，不对称因子。GydF4y2Ba

标准解决方案的制备：GydF4y2Ba在25ml体积烧瓶中精确地称重10mg托吡酯，并溶于25ml的流动相并用流动相弥补体积。从上面的储备溶液中，通过用流动相稀释0.5ml至10ml来制备20μg/ ml托吡酯。该解决方案用于记录色谱图。GydF4y2Ba

样品制备：GydF4y2Ba称重精确10片剂（Topiramate -25mg）在25ml容量瓶中精确地称重10mg托吡酯，并溶于25ml的流动相并用流动相弥补体积。从上面的储备溶液中，通过用流动相稀释0.5ml至10ml来制备20μg/ ml托吡酯。该解决方案用于记录色谱图。GydF4y2Ba

通过使用下面给出的公式和上表中显示的配方中存在的托吡酯的量：GydF4y2Ba

$$\mathrm{％GydF4y2Ba}\mathrm{一种GydF4y2Ba}\mathrm{S.GydF4y2Ba}\mathrm{S.GydF4y2Ba}\mathrm{一种GydF4y2Ba}\mathrm{yGydF4y2Ba}=GydF4y2Ba\frac{\mathrm{一种GydF4y2Ba}\mathrm{T.GydF4y2Ba}}{\mathrm{一种GydF4y2Ba}\mathrm{S.GydF4y2Ba}}\times GydF4y2Ba\frac{\mathrm{W.GydF4y2Ba}\mathrm{S.GydF4y2Ba}}{\mathrm{D.GydF4y2Ba}\mathrm{S.GydF4y2Ba}}\times GydF4y2Ba\frac{\mathrm{D.GydF4y2Ba}\mathrm{T.GydF4y2Ba}}{\mathrm{W.GydF4y2Ba}\mathrm{T.GydF4y2Ba}}\times GydF4y2Ba\frac{\mathrm{P.GydF4y2Ba}}{\mathrm{100.GydF4y2Ba}}\times GydF4y2Ba\frac{\mathrm{一种GydF4y2Ba}\mathrm{W.GydF4y2Ba}}{\mathrm{L.GydF4y2Ba}\mathrm{CGydF4y2Ba}}\times GydF4y2Ba\mathrm{100.GydF4y2Ba}$$

通过将100mg托吡酯溶解在100ml稀释剂中来制备标准的托吡酯溶液。在使用0.45微米注射器过滤器并超声处理5分钟后过滤溶液。GydF4y2Ba

通过恢复研究确定该方法的准确性。向配方（预分析样品）中，药物的参考标准在50％，100％，150％的水平下加入。恢复研究进行了三次，并计算了药物的百分比回收率和平均恢复百分比。GydF4y2Ba

试用-4 :(优化），试验 - 4 :(优化）GydF4y2Ba

流动相：甲醇;水GydF4y2Ba

在25ml体积烧瓶中精确地称重10mg托吡酯，并溶于25ml的流动相并用流动相弥补体积。从上面的储备溶液中，通过用流动相稀释1.5ml至10ml来制备20μg/ ml托吡酯。该解决方案用于记录色谱图图4。GydF4y2Ba

$$\begin{array}{l}\mathrm{L.GydF4y2Ba}\mathrm{O.GydF4y2Ba}\mathrm{D.GydF4y2Ba}=GydF4y2Ba\frac{\mathrm{3.3GydF4y2Ba}\mathrm{\sigma .GydF4y2Ba}}{\mathrm{S.GydF4y2Ba}}\\ =GydF4y2Ba\mathrm{3.3GydF4y2Ba}*GydF4y2Ba（GydF4y2Ba\mathrm{15086.6.GydF4y2Ba}）GydF4y2Ba/GydF4y2Ba\mathrm{44715.GydF4y2Ba}\\ =GydF4y2Ba\mathrm{3.3GydF4y2Ba}*GydF4y2Ba（GydF4y2Ba\mathrm{15086.6.GydF4y2Ba}）GydF4y2Ba/GydF4y2Ba\mathrm{44715.GydF4y2Ba}\end{array}$$

其中，σ=响应的标准偏差GydF4y2Ba

s =校准曲线的斜率GydF4y2Ba

可以从分析物的校准曲线估计斜率S.GydF4y2Ba

$$\begin{array}{l}\mathrm{L.GydF4y2Ba}\mathrm{O.GydF4y2Ba}\mathrm{问：GydF4y2Ba}=GydF4y2Ba\frac{\mathrm{10.GydF4y2Ba}\mathrm{\sigma .GydF4y2Ba}}{\mathrm{S.GydF4y2Ba}}\\ =GydF4y2Ba\mathrm{10.GydF4y2Ba}*GydF4y2Ba（GydF4y2Ba\mathrm{15086.6.GydF4y2Ba}）GydF4y2Ba/GydF4y2Ba\mathrm{44715.GydF4y2Ba}\\ =GydF4y2Ba\mathrm{3.37GydF4y2Ba}\mu .GydF4y2Ba\mathrm{GGydF4y2Ba}/GydF4y2Ba\mathrm{mGydF4y2Ba}\mathrm{L.GydF4y2Ba}\mathrm{T.GydF4y2Ba}\mathrm{O.GydF4y2Ba}\mathrm{P.GydF4y2Ba}\mathrm{一世GydF4y2Ba}\mathrm{R.GydF4y2Ba}\mathrm{一种GydF4y2Ba}\mathrm{mGydF4y2Ba}\mathrm{一种GydF4y2Ba}\mathrm{T.GydF4y2Ba}\mathrm{E.GydF4y2Ba}\end{array}$$

在哪里GydF4y2Ba

σ=响应的标准偏差GydF4y2Ba

s =校准曲线的斜率GydF4y2Ba

可以从分析物的校准曲线估计斜率S.GydF4y2Ba

为了证明该方法的鲁棒性，根据测试方法制备的解决方案，并在不同的可变条件下喷射，如使用不同的条件，如流速和波长。将系统适用性参数与方法精密表11的比较进行了比较。GydF4y2Ba

通过通过两种不同的分析表12进行测定，通过测定分析器变异来研究该方法的粗糙度。GydF4y2Ba

描述了一种简单且选择性的UPLC方法，用于使用由80体积甲醇和20体积水的混合物组成的流动相，在C18柱上测定托吡酯色谱分离的测定，检测为276nm。在托吡酯50-150μg/ ml的范围内观察到线性度（rGydF4y2Ba^2GydF4y2Ba= 0.998）对于所提出的方法估计的药物量与标签索赔良好。GydF4y2Ba

验证了所提出的方法。通过三种不同水平的恢复研究评估该方法的准确性。恢复实验表明，没有常见的药物添加剂的干扰。该方法被发现如重复分析所示，显示％RSD小于2.所有统计数据证明了该方法的有效性，可用于药物剂型的常规分析。GydF4y2Ba

从上述实验结果和参数结束时，发现这种新开发的用于估计Topiramate的方法是简单，精确，准确，高分辨率，更短的保留时间使得这种方法更具可接受和成本效益，并且可以有效在工业中申请研究机构的常规分析，在工业中的习惯，批准在近期测试实验室研究[1-13]。GydF4y2Ba