单价铜离子对酶系统的影响至今尚未研究这是因为单价铜离子在水溶液中的低稳定性,这导致假设其在生物系统中的富集度微乎其微单价铜离子稳定化 高稳定聚单价铜离子单价铜离子聚积这项研究显示单价和二价铜离子对脱氧聚合酶、ligaseT4脱氧核糖核酸、限用酶EcoP15I和EcoRI、二叉酸酶以及α和β酶的影响选择这些系统是因为可以在维持单价铜离子稳定集中所必备条件下对其进行监控,并因为它们表现出对ATP的广泛依赖性。前几次研究表明ATP与单价和二价铜离子并稳定单价铜离子对二价铜离子结果表明单价铜离子极大抑制脱氧聚合酶和酸磷塞,抑制ligaseT4脱氧核糖核酸和限制酶EcoP15I,中度抑制α和βamylase,对限制酶EcoRI不产生作用

从工作结果中可以得出结论,机制不是氧化压力机制,即使单价铜离子生成活性氧类分子氧中应增加氧化应力,损耗单价和二价铜离子抑制效果,抑制运动不适合ROS机制

ATP组成铜离子复合体(二值单值离子,后者比较稳定),金属离子同时绑定到氮基和磷酸盐组装氧上,形成异常扭曲复合体研究结果显示这些复合体有能力抑制依赖ATP的酶系统

发现可解释单价铜离子强抗菌活动,说明快速致命代谢损害是单价铜离子抗菌效果的主要机制

Cu+离子、Nzyme抑制器、DCP聚合物和PCR磷酸酯、约束酶、里加斯、Amylase、Actice效果、ATP综合体

单价铜离子对酶系统的影响至今尚未研究这是因为单价铜离子在水溶液中的低稳定性,这导致假设其在生物系统中的富集度微乎其微单价铜离子稳定化 高稳定聚单价铜离子单价铜离子聚积这项研究显示单价和二价铜离子对脱氧聚合酶、ligaseT4脱氧核糖核酸、限用酶EcoP15I和EcoRI、二叉酸酶以及α和β酶的影响选择这些系统是因为可以在维持单价铜离子稳定集中所必备条件下对其进行监控,并因为它们表现出对ATP的广泛依赖性。前几次研究表明ATP与单价和二价铜离子并稳定单价铜离子对二价铜离子结果表明单价铜离子极大抑制脱氧聚合酶和酸磷塞,抑制ligaseT4脱氧核糖核酸和限制酶EcoP15I,中度抑制α和βamylase,对限制酶EcoRI不产生作用

从工作结果中可以得出结论,机制不是氧化压力机制,即使单价铜离子生成活性氧类分子氧中应增加氧化应力,损耗单价和二价铜离子抑制效果,抑制运动不适合ROS机制

ATP组成铜离子复合体(二值单值离子,后者比较稳定),金属离子同时绑定到氮基和磷酸盐组装氧上,形成异常扭曲复合体研究结果显示这些复合体有能力抑制依赖ATP的酶系统

发现可解释单价铜离子强抗菌活动,说明快速致命代谢损害是单价铜离子抗菌效果的主要机制

Cu+离子、Nzyme抑制器、DCP聚合物和PCR磷酸酯、约束酶、里加斯、Amylase、Actice效果、ATP综合体

Enzymes负责大多数维生生生过程减退酶活动对生活系统造成重大损害细菌小单细胞更容易减少酶活动泛金属离子,特别是过渡金属离子,可能对各种酶活动产生重要影响,并确实积累了大量知识,了解生物系统发现的离子对酶活动的影响。单价铜离子对酶系统的影响迄今尚未研究过,原因是单价铜离子在水溶液中的稳定性较低,导致估计生物系统中的浓度微乎其微尽管如此,最近研究表明单价铜离子(Cu+)对原生细胞有明显效果[1、2]

铜(Cu)是所有生物体基本微量元素高富集度可产生生物灭火效果最近单价铜离子⁺)建议成为铜反微生物活动[1]中的积极因素机制Cu⁺离子抗菌效果尚不完全理解, 最近发布的结果显示,酸pH条件不适碳源和高温会增强Cu抗菌动作⁺离子图不到一分钟内 0.4mCU+离子消除⁶/cm³E.coli细菌群微镜E.coli形态显示细菌死亡,几乎没有解析[2]

Silver还被称为生物杀菌剂,特别是单价银离子形式(Ag+)[3]铜银相似元素(coins元素)和单价离子相似电子配置(d10),因此有理由假设两种离子都相似生物杀机机制

铜离子²⁺和Cu⁺已知会形成反应式氧生物量,包括脱氧核糖核酸和染色体[4]体外用隔离脱氧核糖核酸或染色体或通过培养哺乳动物细胞接触配有各种代理物的铜综合体[5,6文献显示 铜离子不催化氧化性DNA损耗[7-9]

即便如此,活细胞中也有机制控制细胞内铜离子集中度[10]TP7b和CopA泵溢出铜从单片流出并注入 Periplasm[11]铜离子一旦进入极值系统后受另外两个系统约束,即CueO和CusCFBA帮助CopA控制细胞内铜水平CueO多码氧化酶转换Cu⁺离子到库²⁺离子低毒性表表[11]似乎铜离子, 特别是形式库⁺是对细菌细胞的重大威胁

铜离子在反微生物武库中使用原生放牧法和免疫分片并影响Staphilcocccusaeus核心碳代谢,这意味着细胞内活动[12]

水解法单价状态下铜⁺_(q)相较于铜离子常见氧化状态即二价状态(Cu²⁺_(q)或库普里)单价铜离子水解法²⁺_(q)和Cu⁰_s)和有氧环境 快速响应分子氧结果,水溶单价铜离子富集度通常极低要实现单价铜离子水溶液高度集中化,必须在解决方案中添加单价离子法,如ecitonrile、benzoic酸或aTP离子倾斜氧化状态间现有平衡,从Cu2+离子和金属铜形成2Cu+离子此外,溶液中的分子氧浓度必须低

工作使用乙烟,浓度为0.1M水溶液,引起完全反射₃)₂万事通⁺_(q)综合体[13]

生物系统不可忽略单价铜与氨基聚类(蛋白酸、核酸)、有机硫(methionine、cystene、cystine)和不饱和或芳香系统[17-20]连接的可能性

ATP组装铜离子综合体²⁺和Cu⁺离子网后者比较稳定),金属离子与氮基和磷酸组负载氧并存,形成异常扭曲复合体(图10)[16、21、22]似乎这些复合物可抑制依赖ATP的酶系统

论文的目的是测量Cu+对多酶系统的影响,并增进我们对机制机制的了解系统包括聚合器(使用PCR系统研究)限用酶EcoP15I3型t4ligase需要aTPEcori2型甲型和乙型amylase和磷化物联结操作磷化物 通过标准实验程序研究

脱氧核糖核酸分子合成由脱氧核酸聚合酶[22]催化脱氧聚合酶对脱氧核糖核酸复制至关重要,在此期间,脱氧核酸聚合酶复制现有的脱氧核糖核酸树枝以创建两个新线以匹配现有线酶催化下列反应

聚合酶链反射法商业方法,如今在分子和医学生物中广泛使用,制作数组(千亿至数十亿分数组)特定脱氧核糖核酸段方法使用可热式脱氧核聚变酶,如Taq聚合酶,一种原与热益菌分离的酶[23]

聚合酶链反射法商业方法,如今在分子和医学生物中广泛使用,制作数组(千亿至数十亿分数组)特定脱氧核糖核酸段方法使用可热式脱氧核聚变酶,如Taq聚合酶,一种原与热益菌分离的酶[23]

本研究在厌氧条件下使用商业聚合物链响应系统

sligase T4脱氧核糖核酸酶通过催化磷化物联结(equation2)促进脱氧核糖核酸链绑定

T4磁带是实验室研究中最常用酶之一应当指出,就我们的目的而言,它需要ATP作为共因子[24]

约束性酶是将脱氧核糖核酸分解到特定识别点或附近限用酶有三种类型:类型1需要ATP和S-ADENOSYL-METHINE二型不需要aTP类型3需要aTP,但不流水解析四型酶目标修改dg

研究使用限用酶EcoP15I3类需要ATP和EcoRI2类不需要ATP操作

酸磷素(EC3.1.3.2)是一种酶,用于从其他分子中释放附着磷基多种类动物和植物都产生这种酶,对保持正常代谢活动至关重要。这项研究使用伪硝基磷酸盐为基质,获取伪硝基化醇为产品[26](eqity 3)。

系统很容易通过产品410nm吸收带跟踪UV-VIS光谱

酶A-mylase分解长链芯片(starch)从amyopectins产生麦芽甘油、甘蔗糖和“限丁dextrin”(equation4)[27]

ec3.2.1.2glucanallase替代名glycogencesacharogenayllase综合使用细菌、真菌和植物从非下降端工作,二A-1-4glycodi联结水解分解

各种酶抑制器可降低酶反应率,即竞争性、非竞争性、非竞争性、非竞争性和不可逆性动脉研究确定抑制性已经对磷化物系统进行了这种研究,因为运动监测比较简单。

反氧介质 :无氧介质通过反射介质冒出agon气多数实验中反应介质存放在密封容器中,如一瓶penicllin或针筒实验中难以用密封容器工作(PCR、限用酶EcoP15I和EcoRI和T4DGLIGASE酶),反应解析法在厌氧阶段保留在Argon气流下

Cu+离子实验求解[15]:酶实验前Cu+离子生成自分解水解混合Cucl2作为Cu2+离子源、金属铜源和0.1Ma

$$\begin{array}{l}\mathrm{C级}{\mathrm{欧市}}^{2+}+\mathrm{C级}{\mathrm{欧市}}^0+\mathrm{N级}\mathrm{C级}{\mathrm{H级}}_3\mathrm{C级}\mathrm{N级}\stackrel{{\mathrm{H级}}_2\mathrm{O级}}{\to }2{[\mathrm{C级}{\mathrm{欧市}}^{+}高山市\mathrm{C级}{\mathrm{H级}}_3\mathrm{C级}\mathrm{N级})\mathrm{N级}万事通}^{+}\\ {\mathrm{K级}}_{\mathrm{一号}\mathrm{百分数}\mathrm{C级}{\mathrm{H级}}_3\mathrm{C级}\mathrm{N级}}=\mathrm{一号}*{10}^2\end{array}$$

方程6

通过针头注入铜离子解析法含有Cu+离子的溶液通过三向注射阀注入厌氧介质

热电阻:gel电光片按大小和电荷分离脱氧核糖核酸片段,以便识别并量化PCR、Ligase和限制酶活动量化方法测量所生成条状光度,并对比同一运行中已知脱氧核糖核酸标码(阳性/负性控制)光度获取标定数表示酶活动,使用数字图像J程序(LOCI,威斯康星大学Madison研究实验室Kevin Eliceiri,LABORATIONE应当指出量化是为了酶活动,而不是DNA碎片

PCR(粒子链响应) [22]:PCR响应关键成份为Taq聚合素、初级素、模板脱氧核糖核酸和核酸元件成分组装成管状并配有酶需要的共构物,并受重复加热和冷却循环约束,允许合成脱氧核糖核酸

研究中所有PCR实验分以下阶段:(1)98C10分95+C20s3+C2072+C50分钟5级2至4复用35次(6)72+C5分钟(7)向16QC冷却直到样本分析

PCR实验使用正常解析组成系统,内含:Taq聚合素、初级素、PDNA、PCR水和0.2MdNTP除NSC解析法外,大多数PCR实验含有0.3%CH3CN金属离子(作为氯化盐),最终富集度介于80-0.08M之间

在当前研究中,我们使用PEPI-EGFT矢量生成的EGFP基因组369bp脱氧核糖核酸模板

DNA耐氧化性由脱氧核糖核酸段测量(从受限酶割除的粒子中测出),该段在上述多氧大气中与8mCU2+、Ni2+、Zn2+和Cu+离子混合段使用Gel电阻技术测试修改

T4脱氧核糖核酸SigmaAldrich产品号d2886测试三片脱氧核糖核酸:PZIP-mCMV-RFP-Puro-V033分离E.coli细菌并用三种约束酶割除脱氧核糖核酸段装配24小时T4酶ATP缓冲式Tris-HCL生成的脱氧核糖核酸分电阻并对比反应混合而无酶

约束酶EcoP15IandEcoriPlasmidp-mCMV-RFP-Puro-(V033)测试,使用推荐程序与E.coli隔离,并有Cu2+和Cu+ionsu生成混合用凝胶电阻技术测试

酸磷酸CU2+和CU3V-VIS光谱检验产品pH9.5碳酸/双碳酸缓冲pH9.5

酶a-mylaseEC 3.2.1.1和Esperglusoryzaee-amylase测试马铃薯淀粉(Sigma-aldrich)时使用acate缓冲法pH4.8产品(gluces in a-amyrace和malse in Qamyras)量由Nelson试剂使用COSO4确定,COSO4按高pH值对glucese和mastese进行声学氧化(cartate/bcarte缓冲ph9.5) [29,30]下调铜CU2date通过UV-VIS光谱分析确定 650nm吸附带对标定曲线必须指出,二价铜离子不氧化甘蔗或麦芽,同分析判定糖的浓度相比,酶反应中的铜离子浓度可忽略不计

处理动能结果产品依赖时间最大速度可判定(Vmax)和反应速度依赖基数集中性线织-布尔克方程[31](等式7)并判定酶抑制是竞争性、非竞争性或非竞争性

$$\frac{\mathrm{一号}}{{\mathrm{V级}}_0}=\frac{{\mathrm{K级}}_m}{{\mathrm{V级}}_{\mathrm{最大值}}[\mathrm{S级}万事通}+\frac{\mathrm{一号}}{{\mathrm{V级}}_{\mathrm{最大值}}}$$

方程7

铜离子浓度对厌氧条件下Taq聚合物效应比较图1显示(PCR实验电阻结果)。

期望脱氧核糖核酸产品显示在369bp上(图12和4中正向和异向控件)。

Cu2+离子集中度为1*10⁴M或更高层抑制脱氧核糖核酸生产库市⁺离子作用显赫:集中度为1*10⁷MCU⁺离子值(下限能力)脱氧核糖核酸生产受抑制(图一第13行)。

图2显示数字图像J处理与电光实验结果归并⁺Ag大全⁺中环²⁺并富氧CU2+离子富集

合理假设大都库²⁺离子效果部分减到Cu⁺离子图有氧环境库⁺离子快速氧化到Cu²⁺离子减少Cu⁺离子集中图2显示结果支持这一假设此外,分子氧响应Cu⁺势必生成活性氧种类(ROS),但与Cu相比,氧化性应力效果似乎微乎其微⁺效果

表1汇总使用图象J处理软件分析电光结果的PCR实验相关结果所有实验至少重复两次

图2和表1清楚地表明Cu⁺和Ag⁺离子和Ni不同²⁺和Zn²⁺:后者几乎没有或完全没有对Taq聚合物显示Cu⁺离子块PCR比Ag低100倍⁺.

DNA耐氧化性排除DNA氧化机制,用8微米Cu对限制酶解析的脱氧核糖核酸段(4、3和1.2KB)⁺²....⁺²zn⁺²和Cu⁺离子有氧条件图3显示电光结果

图3显示结果显示,我们可以排除DNA氧化机制,作为在此执行的PCR实验时标和集中机制

Ni效果²⁺zn²⁺中环²⁺和Cu⁺磷素酶离子Asperglusoryzae使用p-硝基苯磷化物(PNP)生产p-nipreenol(PNP)(eqation3),图4显示

图4显示Cu+离子对磷酸酶的巨大影响

可见双价铜、锌和镍离子效果可忽略不计双价铜离子效果可能有助于单价铜离子形成

图5显示8mmCu响应结果²⁺Cu+ion(1%CH3CN)无氧条件

图5显示Cu震荡⁺离子磷素酶

确定抑制性质时,当着Zn对数个基质富集度(0.1-20m)进行了动能实验²⁺....²⁺中环²⁺和Cu⁺离子值(1%CH₃氯化萘免氧条件

使用Linewever-Burk绘图判定V_最大值k_m脱机图6和值显示图V_最大值k_m)表2显示

从Linewever-Bark图和V_最大值k_m值很明显Cu⁺离子对PNP/(PNP)系统磷化酶非竞争抑制

Cu+离子对ligaseT4DNA效果图7显示Ligase T4脱氧核糖核酸酶操作3个脱氧核酸段(4,3和1.2KBnegification)产生长脱氧核酸段(1.5,4.1,6和大于10KB-正控件)实验是在Cu现场反氧条件下进行的⁺²和Cu⁺离子图

图7显示Cu⁺和Cu²⁺离子抑制酶 Cu效果⁺离子比较大(1.2KB脱氧核糖核酸段信号以0.8mmCu可见⁺i)/

Cu效果⁺限制酶EcoP15I离子微博8展示EcoP15I神经元电阻操作pZIP模件(负控件)产生脱氧核糖核酸段(正控件)。

图8显示Cu⁺和Cu²⁺离子抑制约束酶EcoP15I脱氧核糖核酸段与负控值(10KB)保持相同位置,没有其他脱氧核糖核酸段因酶作用而出现,正控值显示(>10KB)。此外,Cu+效果更大(摄取量高于0.1mm

Cu效果⁺离子约束酶Ecori图9显示EcoRI酶操作pZIP粒子的电光效果PZIP粒子仍然闭圈,信号显示~5KB生成脱氧核糖核酸段昆虫切片开粒子并发信号距离小至10KB实验是在0800mzn在场的情况下在厌氧条件下进行的²⁺....²⁺中环²⁺中环⁺和Mg²⁺离子类²⁺上方控件)

Fig结果9显示无Cu效果⁺和Cu²⁺离子Ecori酶

Cui离子对a-Amylase和e-Amylase效果10mNi效果²⁺zn²⁺中环²⁺和Cu⁺单片amylase和e-mylaseenzymes上离子分别在 starch生成甘蔗和麦芽

从图10显示的结果中可以得出结论,Cu+离子比锌和镍离子产生抑制效果,Betaa

在这次研究中,我们试图证明单价铜离子对易感测酶系统有重大影响

第一批酶为DNTTaq聚合酶、DNT约束和绑定酶,全部由电频监控

高温商业PCR系统测量Taq聚合物酶,防止大气氧分解并维护高效厌氧解法结果显示用单价铜离子实施剧烈抑制,使用量小于1^*10⁷元元库⁺离子系统完全关闭,而Ag⁺离子需求 1^*10^5级M和1^*10^5级元元库²⁺离子显示小效果

图2清晰显示保持厌氧条件允许Cu⁺禁止Taq聚合物允许分子氧干扰铜离子效果二价铜效果可部分归结于单价铜的存在,在厌氧条件下,单价铜比增加[32,33]

T4脱氧核糖核酸酶和3类限用酶EcoP15I受铜离子极大阻塞时Cu+和Cu²⁺离子抑制酶 Cu+离子效果比较大

与前述酶不同,二类限制酶Ecori无关,二类不要求二类同源酶不受铜离子或单价铜离子的影响。

第一组测试酶中(约束、绑定和聚合脱氧核糖核酸),需要ATP的酶受到单价二价铜离子的极大抑制,而不需要ATP的酶则完全不受铜离子的影响。

第二组酶包括磷酸酯和甲型和乙型氨酸酯,用光谱测量法检验这些酶不要求ATP函数化,尽管Phoneatase酶对ATP或类似ATP衍生物有作用

磷素酶通过磷酸盐组水解法研究,从p-nit-p-phen-p-p-p-p-p-p-p-p-p-p-p-p-p-p-p-p-p-p-p-p-p-p-p-p-p-p系统可保持厌食条件,允许工作使用已知聚聚单价铜

磷酸盐被发现受单价铜阻塞性非竞争性5基底芳香环部分类似于ATP中的adenosine单价铜与芳香环交互作用, 并可能与磷酸盐上负载氧[1534]交互作用可能与抑制机制相关稀疏铜不与芳香环交互作用,也不抑制酶

单价铜离子还发现抑制alpha和betaamylase酶效果不如磷酸盐强,但绝对重要

甲型和乙型amylase酶不需要aTP函数单价铜抑制器显然不支持单价铜与ATP复合体在抑制酶机制中发挥重要作用的假设单价铜离子效应 似乎由别机制产生单价铜分解SS联结蛋白质[35]

研究显示单价铜单价银离子(仅在PCR系统测试)抑制基本酶

机制不是氧化性应激机制,即使单价铜离子(比双价铁离子多得多)与分子氧发生反应(不要求二价铜离子过氧化氢)生成活性氧类(ROS),这样芬顿式响应可以启动而无氢过氧化物[4]如果机制为氧化压力机制,我们期望有氧大气会增强效果结果显示相反:厌氧环境会增加效果单价和双价铜离子确实生成活性氧种类(ROS),但后者对系统的影响与主效果相比微乎其微单价银离子不生成活性氧类⁺抑制聚合酶(并产生杀菌效果),显然机制类似于Cu⁺.

先前研究研究铜离子生成氧化应力作用后发现 vivo[7,8,9]没有损耗脱氧核糖核酸非细胞毒性富集度,铜离子抑制修复可见光诱发的氧化式脱氧核糖核酸,抑制可能出自Cu+离子对酶功能造成的损害,而非氧化性应力[8]图6显示,脱氧核糖核酸粒子保持权重,不受单价铜离子和分子氧损耗

事实库⁺离子可起抗氧化剂作用最新结果显示Cu+离子复合ATP极快响应甲基₃.)生产Cu²⁺离子和甲烷终结基链(equation8)[16]

前一份报告显示铜离子减少Fe造成的氧化式脱氧²⁺ions和H₂O级₂[8]

实验中 多亏介质中乙蚁Cu⁺离子不经历水求解所期望的不相称反应最近结果显示ATP和adenosine与Cu形成强复合⁺离子移位左向

维沃合理假设ATP和其他核酸作为Cu固态ligands⁺细胞内离子

强联想Cu²⁺离子单机电基与负载磷酸组相互作用,导致ATP综合体变形[21](图10)。

计算显示复合库⁺ATP相似库²⁺ATP复杂库族⁺离子强交互基数和磷酸盐组数导致ATP扭曲并折叠,扭曲综合体可能干扰ATP作为酶系统共同因子的功能[16]

slszn²⁺和Ni²⁺系统作用微乎其微库市²⁺有效果图5已知酶系统需要Mg²⁺离子正确运算酶,但在富集度测试中未观察到Mg局部交换²⁺离子Zn²⁺和Ni²⁺或Cu²⁺产生显著效果可能大都效果库²⁺归结为Cu⁺中稳定Cu⁺环境文献中曾提到Cu²⁺离子快速归结⁺硫化液离子解解法,包括多谷素和cystene

假设Cu⁺离子抗菌机制功能通过酶抑制也得到最近结果的支持,显示高温会增强Cu抗菌动作⁺离子[2]不到1分钟时40++040M消除105细菌对比20+C实验 留102细菌1分钟后生存²⁺离子控制条件完全无效热刺激新陈代谢,永久酶抑制因酶活动放大此外,结果显示Cu抗菌效果⁺E.coli使用甘油作为唯一碳源时较高,与甘蔗和甘蔗比较细菌适应甘蓝唯一碳源比用甘蔗生长的细菌更容易受酶抑制的影响很明显,效果不单通过细胞分治,因为如果情况如此,延长生成时间会最小化效果结果显示相反

前几期研究证明氧化铜的抗癌效果在最近的论文中,FedopedCuONPs体外测试,结果多元子网鼠模型完全肿瘤恢复癌症细胞代谢率远大于正常细胞因此它很可能更容易受铜离子抑制效果的影响,或更精确地说Cu⁺离子图似乎Cu²⁺离子从CuONPs下降⁺癌症细胞中的离子可能抑制脱氧核糖核酸聚合物

我们建议Cu⁺和Ag⁺离子行为干扰新陈代谢,例如脱氧核糖核酸聚合酶、磷酸酶等,通过无竞争抑制酶

比以往更加相关,这一发现可能暗示Cu可能发挥作用⁺离子生成系统像抗病毒剂然而,这个概念还有待证明。

单价铜离子抑制细胞函数必备酶解释单价铜的重大抗生素效果 文献中缺失的解释

细菌铜毒性机制的可能解释包括氧化机制,尽管单价铜离子与分子氧快速反应以获取氧化产品氧化机制据本文发现可忽略不计

文献中提及的另一种机制包括以蛋白质解析SS联结[35]除α和βamylase外,这一解释对本研究所审查案例无效,因为它们不包含SS债券[38,39]

已知生物酶系统单价铜离子可组成多功能组分(单价铜离子必须与水环境稳定绑定以避免不相称反应),有基础考虑ATP在稳定单价铜离子方面起重要作用,Cu⁺ATP和Cu²⁺ATP综合体在ATP依赖性酶抑制机制中作用

本条不包含由任何作者对人或动物进行的任何研究