弯曲杆菌孢子菌是世界上最常见的急性腹泻细菌病原体。

材料与方法:2017年，260名腹泻综合征患者住院。经培养和多重PCR检测，其中弯曲杆菌阳性66例(25.38%)。临床分离株对5种抗菌素进行了药敏试验。

结果:弯曲杆菌60株(91%)为空肠弯曲杆菌，6株(9%)为大肠弯曲杆菌。所有空肠/大肠杆菌分离株对阿奇霉素(AZI)敏感，所有大肠杆菌分离株对克拉霉素(CLA)和红霉素(ER)敏感。3株空肠梭菌(5%)对CLA耐药，7株(11.6%)对ER耐药。35株空肠球菌(58.3%)和2株大肠杆菌(33.3%)对环丙沙星(CIP)耐药。对四环素(TE)的耐药性，空肠梭菌为23(38.3%)，大肠梭菌为1(16.6%)。空肠梭菌对CIPCL- ER-TE同时存在3株多耐药菌株(5%);CL-ER-CIP有3 (5%)，TE-ER有7(11.6%)。大肠杆菌中有1株(16.6%)te - er耐药菌株。

讨论:已经观察到弯曲杆菌对最常用的抗菌剂的耐药性增加。尤其令人担忧的是对环丙沙星的高耐药性，以及日益常见的多药耐药菌株。

弯曲杆菌，环丙沙星，抗生素，四环素。

弯曲杆菌孢子菌是世界上最常见的急性腹泻细菌病原体。

材料与方法:2017年，260名腹泻综合征患者住院。经培养和多重PCR检测，其中弯曲杆菌阳性66例(25.38%)。临床分离株对5种抗菌素进行了药敏试验。

结果:弯曲杆菌60株(91%)为空肠弯曲杆菌，6株(9%)为大肠弯曲杆菌。所有空肠/大肠杆菌分离株对阿奇霉素(AZI)敏感，所有大肠杆菌分离株对克拉霉素(CLA)和红霉素(ER)敏感。3株空肠梭菌(5%)对CLA耐药，7株(11.6%)对ER耐药。35株空肠球菌(58.3%)和2株大肠杆菌(33.3%)对环丙沙星(CIP)耐药。对四环素(TE)的耐药性，空肠梭菌为23(38.3%)，大肠梭菌为1(16.6%)。空肠梭菌对CIPCL- ER-TE同时存在3株多耐药菌株(5%);CL-ER-CIP有3 (5%)，TE-ER有7(11.6%)。大肠杆菌中有1株(16.6%)te - er耐药菌株。

讨论:已经观察到弯曲杆菌对最常用的抗菌剂的耐药性增加。尤其令人担忧的是对环丙沙星的高耐药性，以及日益常见的多药耐药菌株。

弯曲杆菌，环丙沙星，抗生素，四环素。

在欧洲和北美，弯曲杆菌感染是细菌性肠胃炎的主要原因。这是一种典型的食物感染，其来源是家禽和野生鸟类，主要是肉鸡，这种人类疾病最常由与禽肉接触的各种食品的制备过程中所谓的杂交引起。很少的情况下，来源可能是未经高温消毒的牛奶，受污染的饮用水，宠物或病人。弯曲菌病也是旅行者腹泻的原因之一[1-5]。

人类腹泻疾病的主要病原体是空肠弯曲杆菌和大肠弯曲杆菌。尽管空肠梭菌很少被描述为一些自身免疫性疾病的病因，如格林-巴利综合征、感染后关节炎、神经疾病等。在实践中，大环内酯类药物(阿奇霉素、克拉霉素)，特别是氟喹诺酮类药物(环丙沙星)最常用于儿童和成人的抗菌治疗。许多作者将四环素描述为一种可能的选择，但在实践中很少使用。由于在肉鸡养殖中氟喹诺酮类药物的频繁使用和抗菌治疗的滥用，大量研究表明，对氟喹诺酮类药物、四环素类药物甚至一些大环内酯类药物的耐药性急剧增加[1-5]。本研究的目的是检测住院腹泻综合征患者中分离的空肠杆菌和大肠杆菌的流行情况和耐药性。

本研究中作为阳性对照的菌株为空肠C. ATCC 33560和大肠C. C. 14.2。

2017年，从0-80岁腹泻综合征住院患者中收集了260份粪便样本。

根据生产商的说明，每一份粪便都用CerTestBiotec公司的免疫层析法进行检测。在所有阳性样本中，含有10%除颤羊血的纯血琼脂(BulBio，保加利亚)在孔径为0.45 μm的硝化纤维素膜(SartoriusStedimBiotech)上进行。将种子培养在微嗜氧气氛(5% O2 + 10% CO2 + 85% N2)中，这是由气体产生的“Helyco-Campy Pac”在厌氧罐(Oxoid, USA)中在42-43°C培养24-72小时。

根据ISO 10272-1: 2006和ISO/TS 10272-2: 2006的验证试验使用纯培养。我们使用过氧化氢酶和氧化酶试验，水解的hippate钠和indoxir醋酸酯。

为了从新鲜培养液中分离DNA，使用裂解缓冲液PrepManTM Ultra (Applied Biosystems, Foster City, CA)。3对引物，对空肠杆菌/C菌株进行鉴定和鉴别。大肠杆菌进行多重PCR分析。扩增基因的引物有以下序列:为cadF-F-TTGAAGGTAATTTAGATATG，为cadF-R -CTAATACCTAAAGTTGAAAC;为大有希望的人,F-GAAGAGGGTTTGGGTGGTG, for hipOR- AGCTAGCTTCGCARAATAACTTG;为asp- F-GGTATGATTTCTACAAAGCGAG, forasp-RATAAAAGACTATCGTCGCGTG。最终反应体积为25 μl，其中包含1xtaqdnna聚合酶缓冲液;MgCl2约4毫米;0.2 mM dNTP;0.03 U/μl SuperHotTaq DNA聚合酶(德国Applichem GmbH公司);0.6μMcadF-F / R;0.2μMasp-F / R;0.2 μMhipO-F/R和5 μl DNA。温度区间为94℃5分钟-初始变性，随后35个循环:94℃- 45秒-变性，52℃- 45秒-杂化，72℃- 60秒-延伸，72℃- 2分钟-最终延伸步骤。所有PCR产物在1 × TBE缓冲液中以6V/cm、100 Ams、2%琼脂糖凝胶中进行标准琼脂糖电泳。 Visualization of the amplified products and molecular markers was performed by illuminating by ultraviolet a light transilluminator.

我们采用Kirby-Bauer标准圆盘扩散法，根据里昂证券指南的建议和标准进行试验。为了解释抑制带的大小，我们使用了与肠杆菌科相关的里昂证券标准。

在260个检测探针中，66个(25.38%)弯曲杆菌阳性，其中60个(91%)为空肠弯曲杆菌，6个(9%)为大肠弯曲杆菌。

对分离株进行了临床治疗弯曲杆菌感染的5种抗菌素的药敏试验。数据解释显示，所有分离株对至少一种抗菌药物敏感。所有空肠/大肠杆菌分离株对阿奇霉素(AZI)敏感，所有大肠杆菌分离株对克拉霉素(CLA)和红霉素(ER)敏感。3株(5%)空肠梭菌对CLA耐药，7株(11.6%)对ER耐药。35株(58.3%)空肠分离菌对环丙沙星(CIP)耐药，2株(33.3%)大肠杆菌耐药。对四环素(TE)的耐药性，空肠梭菌为23(38.3%)，大肠梭菌为1(16.6%)。空肠梭菌中同时有3株(5%)对CIP-CL-ER-TE多重耐药;3 (5%) - CL-ER-CIP, 7 (11.6%) - TEE-ER。大肠杆菌中有1株(16.6%)TE-ER耐药分离株(表1)。

尽管弯曲杆菌病通常表现为一种轻微的自限性腹泻疾病，但儿童和免疫功能低下的患者通常发展为严重的肠胃炎或严重的肠外并发症。在严重的循环和基础疾病的情况下，必须对感染进行抗菌治疗，大环内酯类药物和氟喹诺酮类药物在临床实践中使用最频繁[1]。在保加利亚，最常用的药物是克拉霉素、红霉素和环丙沙星[6]。一些弯曲杆菌菌株的抗菌素耐药性在世界上越来越普遍。空肠弯曲杆菌对ER的耐药性相对较低，约为5%，是欧盟(EU)使用最广泛的药物之一。自20世纪末以来，人们就已经知道了有关抗cipp菌株增加的令人担忧的数据。目前，在欧盟，这一比例已达到平均47.4%。由于对氟喹诺酮类药物的耐药是由于两种协同作用机制，在抗生素治疗过程中，氟喹诺酮类耐药突变体迅速发育，即使在去除选择后菌株仍然存在[1,5]。

正如其他欧盟国家报告的那样，我们的数据也显示空肠梭菌菌株对CIP具有惊人的高耐药性。尽管明显较低，但我国空肠梭菌对ER的耐药性与其他欧洲国家大致相同。许多作者认为大肠杆菌对大环内酯类药物的抗性高于空肠杆菌，但在我们的研究中并没有发现这种规律性。这很有可能是由于我们接触的大肠杆菌菌株数量较少所致。在我们的研究中，没有弯曲杆菌菌株表现出对AZI的耐药性，这是AZI在使用大环内酯类药物时最常被视为一种选择的前提条件。四环素类药物很少是治疗弯曲菌病的首选药物，我国菌株对弯曲菌病的高耐药性与其他欧盟国家[3]相当。

很快，在2017年，世界卫生组织公布了世界上问题最严重的细菌名单，急需为这些细菌开发新的抗生素分子，如耐氟喹诺酮弯曲杆菌属，在“高度优先”类别[5]中排名第四。近年来，多耐药弯曲杆菌的报道也越来越多，我们的分离株也在我们的工作中被报道。

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