期刊名称:应用科学与研究学者学报
文章类型:研究
收到日期:2018年12月17日,
接受日期:2018年12月27日
发布日期:2018年12月31日
引用:Oyedele TA, Fatoki OA, Oyekanmi J, Kehinde IA(2018)尼日利亚西南部甜瓜种子中真菌的分子鉴定。应用科学研究Vol . 1, Issu: 9(20-23)。
版权:©2018 Oyedele TA。这是一篇在知识共享署名许可条款下发布的开放获取的文章,允许在任何媒体上不受限制的使用、发布和复制,前提是注明原作者和来源。
摘要
贮藏甜瓜种子被真菌侵染,造成质量损失,从而导致种子在不同的变质阶段。这一重要种子的田间害虫已被大量枚举,并已采用常规方法确定病原体的身份。除了之前使用的技术外,本研究还对储藏甜瓜种子的真菌病原体进行了鉴定,并评估了系统发育关系提供的信息。来自六个州中每个州四个镇的四个市场的变色和发霉的种子被直接放在新鲜准备的琼脂上。测定了分离株的培养、微观和分子特性。从菌株中分离得到108株真菌,鉴定为lunata、A. flavus、A. oryzae、C. geniculata、F. equiseti、N. sitophila、L. pseudotheobromae和P. simplicissimum。
关键词
真菌,甜瓜种子,尼日利亚,分子特征。
摘要
贮藏甜瓜种子被真菌侵染,造成质量损失,从而导致种子在不同的变质阶段。这一重要种子的田间害虫已被大量枚举,并已采用常规方法确定病原体的身份。除了之前使用的技术外,本研究还对储藏甜瓜种子的真菌病原体进行了鉴定,并评估了系统发育关系提供的信息。来自六个州中每个州四个镇的四个市场的变色和发霉的种子被直接放在新鲜准备的琼脂上。测定了分离株的培养、微观和分子特性。从菌株中分离得到108株真菌,鉴定为lunata、A. flavus、A. oryzae、C. geniculata、F. equiseti、N. sitophila、L. pseudotheobromae和P. simplicissimum。
关键词
真菌,甜瓜种子,尼日利亚,分子特征。
介绍
尼日利亚西南部是一个地缘政治区域,由六个州组成,其中大部分都有热带雨林,支持瓜的生长。甜瓜(Citrullus lanatus)是西非一种广泛种植和食用的油料种子作物。它是尼日利亚一种重要的作物植物和蔬菜,因其可食用的营养丰富的种子被普遍称为“Egusi”[2]而栽培。甜瓜种子有不同的品种,包括:瓜类、瓜类和瓜类。种子通常是小的,平的和卵形的,包含一个白色的子叶在一个薄壁的壳,边缘有一个厚的环[3]。这些种子富含蛋白质(34.86%)和油(42.29%),还含有钠(162.76ppm)等矿物质,钾(8.28%)和钙(1.49%)[4]被用作调味料,以丰富当地的炖菜[2]的味道和外观,并被应用于许多其他用途,包括提取其油,制备零食和汤增稠剂[5-7]。
尽管甜瓜种子和营养物质很重要,但有报道称它是一个病害库[8],因为它被田间和贮藏病原体感染,会分泌霉菌毒素,导致种子变色,降低营养价值,增加脂肪酸和过氧化值,降低种子萌发[9,10]。
目前已知的病原体基因组中保守区域的序列可以帮助正确识别病原体,同时为理解变异和制定有效的管理策略提供信息。
材料和方法
样品收集
研究人员从尼日利亚西南地缘政治区域的每个州的四个城镇的四个不同市场中随机收集了甜瓜种子。每个市场的种子都经过仔细检查,将变色、明显发霉和物理变形的种子分离出来。
甜瓜种子的真菌分离与鉴定
从每个市场中分离的样品中的20种种子被随机选择并通过在1%次氯酸钠溶液(1%NaOCl)中漂洗一分钟,然后在蒸馏水中进行连续冲洗。在含有马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)的培养皿中镀成八个种子,加入0.3%氯霉素[11]。将平板在28±2℃下孵育5-7天。将出现在每个板上的真菌的代表性菌落被转移至获得每个分离株的纯培养物。确定文化和形态特征,并与标准参考[12]进行比较。
分子表征
这是使用涉及提取DNA的标准技术,使用正向引物IT-1和反向引物IT-4和测序来完成的标准技术完成。将获得的序列与Genbank中的核苷酸数据库进行比较,并且系统发育树是图。
结果和讨论
通过分子表征确定的分离株的同一性表明,除了三个与A. Oryzae TF7,Curvularia Lunata相似之外的三种,它们钻孔与Aspergillus,Curvularia,镰刀菌,神经孢子菌,Lasidioproidia和Penicillium属的分离株的相似性。ZCL3和Penicillium simplicissimum npf-5。在储存的甜瓜种子中也发现是其他物种的曲霉,包括A. Oryzae和A.尼日尔。然而,由于A. niger和Rhizopus Oryzae通过其在先前的研究中的分离证实,其存在仅注意到并且不用于进一步调查(图1-2)[13]。
图1:系统发育树显示了储藏甜瓜种子中的一些亲缘分离物。
图2:系统发育树显示了储藏甜瓜种子中的一些亲缘分离物。
种子中营养素的相对平衡分布使其成为各种真菌的生长和代谢的理想底物。虽然具有高蛋白质含量(包括必需氨基酸),但是除了低水分含量之外,还已知还含有灰(矿物质),碳水化合物,维生素和纤维[14],这对于形成菌丝,菌丝体和菌丝体的形成优选大多数场和储存模具的孢子(表1)。
表1:鉴定由杂交蛋白种子获得的分离物。
样本ID. | 身份 | 加入指定的数量 | 近亲 | 相似度(%) |
---|---|---|---|---|
一个 | 黄曲霉TM-1 | MH716398 | 黄曲霉SZN41 | 94 |
B | Curvularia lunataTM-1 | MH716399 | Curvularia lunataUM296. | 95 |
D | Curvularia lunata | Curvularia lunataZCL3 | 100. | |
E | neuroospora silophila.TM-1 | MH716400 | neuroospora silophila.M21 | 97 |
G | 黄曲霉TM-2 | MH716401 | 黄曲霉 | 98 |
我 | 米曲霉 | 米曲霉TF7 | 100. | |
l | 黄曲霉TM-3 | MH716402 | 黄曲霉SF45 | 99 |
米 | Curvularia geniculata.TM-1 | MH716403 | Curvularia geniculata.CML3602 | 97 |
P | 镰刀菌素equisetiTM-1 | MH716404 | 镰刀菌素equiseticgaj - 81 | 94 |
T | Lasidioplodia pseudotheobromaeTM-1 | MH716405 | Lasidioplodia pseudotheobromaeUY1356. | 95 |
U | 青霉菌simplicissimum |
青霉菌simplicissimumNPF-5 | 100. |
虽然样品B被鉴定为C. Lunata,但系统发育树表现出密切的关系以及与雪氏毒鼠种类的共同血统。以前的研究结果表明,Cochliobolus是Curvularia的极象[15]。分离为曲面属的D和M,也发现曲面属的成员是密切相关的患有类似的祖先,以将B和Textomorph与该属脱落。
此外,虽然已被发现所有分离株感染或殖民各种植物部分,但是曲面属的一些代表已被分离出来自甜瓜种子。图1中的系统发育树所显示的进化历史也表明A. Oryzae和A.Flavus之间的密切关系以及相同物种的其他类似成员。这不是新颖的,因为先前已经确定了这两个物种的基因组中存在同源性(约99.5%),因此提示它们从同一祖细胞(可能是A.FlaVus的菌株)的下降[16]。此外,Kehinde [17]研究了甜瓜的野生害虫,并在该研究中的不同植物部件中获得的11个分离物,但在本研究中仅在储存中发现了Flavus,但是镰刀菌种的代表也被分离出来。
没有参考文献